page_banner

ข่าว

คำถามที่พบบ่อยเกี่ยวกับการเพาะเลี้ยงเซลล์

1. หากได้รับหลอดเซลล์แช่แข็ง ฉันสามารถใส่ลงในไนโตรเจนเหลวโดยตรงเพื่อจัดเก็บได้หรือไม่?

ในหลายกรณี เซลล์ที่ขนส่งบนน้ำแข็งแห้ง (-80 องศาเซลเซียส) สามารถใส่กลับเข้าไปในไนโตรเจนเหลวแล้วละลายอย่างรวดเร็วหลังจากนั้นอย่างไรก็ตาม ความมีชีวิตของเซลล์อาจลดลงหลังการรักษาดังกล่าวสำหรับสายเซลล์ที่ละเอียดอ่อนบางสายพันธุ์ อาจทำให้การฟื้นตัวของเซลล์ทำได้ยากขึ้นปรากฏการณ์นี้คิดว่าเกิดจากการเปลี่ยนแปลงโครงสร้างของผลึกน้ำแข็งภายในเซลล์อันเป็นผลมาจากการเปลี่ยนแปลงของอุณหภูมิดังนั้นจึงแนะนำว่าควรละลายและเพาะเลี้ยงเซลล์โดยเร็วที่สุดหลังจากได้รับลดเวลาการจัดเก็บที่ -80 องศาเซลเซียสอุณหภูมินี้ใช้สำหรับการขนส่งเท่านั้น

การเพาะเลี้ยงเซลล์ที่ถูกถามบ่อย 1
การเพาะเลี้ยงเซลล์ที่ถูกถามบ่อย2
การเพาะเลี้ยงเซลล์ที่ถามบ่อย 4
การเพาะเลี้ยงเซลล์ที่ถูกถามบ่อย 3

2. ควรมีมาตรการด้านความปลอดภัยอะไรบ้างเมื่อนำเซลล์ออกจากไนโตรเจนเหลวเพื่อการกู้คืน?

cryotubes ของเซลล์ในไนโตรเจนเหลวที่ไม่ได้ปิดผนึกอย่างสมบูรณ์และมีไนโตรเจนเหลวรั่วเข้าไปอาจทำให้เกิดการระเบิดได้หากอุณหภูมิของ cryotube สูงขึ้นอย่างรวดเร็วเมื่อละลายดังนั้นจึงแนะนำให้สวมแว่นตาและถุงมือป้องกันเมื่อถอดเซลล์ออกจากไนโตรเจนเหลวสำหรับการช่วยชีวิต ควรเขย่าท่อเยือกแข็งอย่างต่อเนื่องในอ่างน้ำ 37°C เพื่อให้สารละลายเยือกแข็งละลายหมดภายใน 1-2 นาทีหลังจากนั้น เช็ดด้านนอกของหลอดด้วยแอลกอฮอล์เช็ด จากนั้นนำไปที่โต๊ะที่สะอาดเป็นพิเศษ และย้ายเซลล์ไปยังหลอดสำหรับการปั่นแยกที่เติมอาหารเลี้ยงเชื้อ 10 มล. ปั่นแยกที่ 1,000 รอบต่อนาที เป็นเวลา 5-10 นาที ทิ้ง ส่วนลอยเหนือตะกอน เติมอาหารเลี้ยงเชื้อในปริมาณที่เหมาะสม และฉีดเชื้อในขวดเพาะเชื้อและฟักไข่ในตู้ฟักคาร์บอนไดออกไซด์ 5%

3. เหตุใดจึงควรเก็บเซลล์ไว้ในเฟสไอของถังไนโตรเจนเหลวแทนที่จะเก็บไว้ในเฟสของเหลว

เซลล์ที่เก็บไว้ในเฟสก๊าซของไนโตรเจนเหลวมีแนวโน้มที่จะฟื้นคืนชีพมากขึ้นในขณะที่อยู่ในสถานะของเหลวของไนโตรเจนเหลว หากท่อทำแห้งเยือกแข็งไม่ได้รับการปิดผนึกอย่างเหมาะสมหรือมีการรั่วไหล การสัมผัสโดยตรงระหว่างเซลล์กับไนโตรเจนเหลวอาจทำให้ความมีชีวิตของเซลล์ลดลงหลังจากการละลาย

4. สำหรับเซลล์แขวนลอย ฉันจะเปลี่ยนอาหารเลี้ยงเชื้อได้อย่างไร?

การเพาะเลี้ยงเซลล์แขวนลอยสามารถทำได้โดยเพียงแค่เพิ่มอาหารสด (หากเว้นว่างไว้) หรือโดยการแยกเซลล์ออกจากอาหารเลี้ยงเชื้อเก่าโดยการหมุนเหวี่ยง (100 xg เป็นเวลา 5 นาที) แล้วจึงแขวนเซลล์ที่ตกตะกอนอีกครั้งในตัวกลางสดอย่างไรก็ตาม สำหรับเซลล์แขวนลอยส่วนใหญ่ การเพิ่มสื่อเป็นวิธีที่ดีกว่าไม่ว่าจะด้วยวิธีใด สื่อต้องได้รับการต่ออายุก่อนที่เซลล์จะมีความหนาแน่นของความอิ่มตัวสูงสุดความหนาแน่นของความอิ่มตัวของเซลล์แตกต่างกันไประหว่าง 3 x 10 5 และ 2 x 10 6 ขึ้นอยู่กับสายพันธุ์ของเซลล์และสภาวะการเพาะเลี้ยง (การพักผ่อนหรือการกวน ระดับออกซิเจน ฯลฯ)เซลล์ต้องถูกเจือจางให้มีความเข้มข้นของเซลล์ที่ต่ำลงเพื่อให้ได้รับสารอาหารเพียงพอเพื่อให้เซลล์เติบโตแบบลอการิทึมถ้าตัวกลางถูกเปลี่ยนง่ายๆ โดยไม่ลดความหนาแน่นของเซลล์ เซลล์จะทำให้ตัวกลางหมดลงอย่างรวดเร็วและตายหากเซลล์ถูกทำให้เจือจางลงต่ำกว่าความหนาแน่นที่น้อยที่สุด เซลล์เหล่านั้นจะเข้าสู่ระยะหน่วงและเติบโตช้ามากหรือจะตายกลุ่มเซลล์แขวนลอยแต่ละกลุ่มมีความหนาแน่นของความอิ่มตัวและช่วงการส่งผ่านที่แตกต่างกัน ดังนั้นการนับเซลล์ในแต่ละวันจึงเป็นวิธีการตรวจสอบสายพันธุ์ของเซลล์แขวนลอย*

5. ระดับ CO2 ที่แนะนำสำหรับการเพาะเลี้ยงเซลล์คืออะไร?

แม้ว่าระดับ CO2 ในระบบการเพาะเลี้ยงเซลล์จะอยู่ในช่วง 0.03% ถึง 40% (โดยทั่วไปจะอยู่ที่ประมาณ 0.03% CO2 ในบรรยากาศ) เป็นเรื่องปกติมากที่ไม่มี CO2 ถูกเติมในอากาศหรือความเข้มข้นของ CO2 ที่ 5% ถึง 10%สิ่งสำคัญคือต้องปรับความเข้มข้นของโซเดียมไบคาร์บอเนตในตัวกลางให้สมดุลกับระดับ CO2 ในระยะแก๊สเซลล์ผลิต CO2 และต้องการกรดคาร์บอนิกจำนวนเล็กน้อยเพื่อการเจริญเติบโตและการอยู่รอดหากไม่มีการเติม CO2 และเซลล์กำลังทวีคูณ สามารถใช้โซเดียมไบคาร์บอเนตปราศจากน้ำ 4 มิลลิโมลาร์ (0.34 ก./ลิตร) ได้อย่างไรก็ตาม ควรขันฝาขวดเพาะเชื้อให้แน่น ณ จุดนี้ถ้าระบบการเพาะเลี้ยงต้องใช้คาร์บอนไดออกไซด์ 5% หรือ 10% ให้ใช้โซเดียมไบคาร์บอเนต 23.5 mM (1.97 g/L) หรือ 47 mM (3.95 g/L) ที่ 37°C ตามลำดับ โดยมีค่า pH เริ่มต้นประมาณ 7.6ภายใต้เงื่อนไขเหล่านี้ ควรเปิดขวดทิ้งไว้โดยไม่ปิดฝาหรือควรใช้จานเพาะเชื้อเพื่อรักษาสมดุลของแก๊ส

6. ทำไมบางเซลล์ถึงต้องการโซเดียม ไพรูเวต?ฉันควรเติมโซเดียมไพรูเวตลงในสื่อมากแค่ไหน?

Pyruvate เป็นสารเมตาโบไลต์ของกรดอินทรีย์ในวิถีไกลโคไลติก* ที่เข้าและออกจากเซลล์ได้ง่ายดังนั้นการเพิ่มโซเดียมไพรูเวตลงในสื่อจึงให้ทั้งแหล่งพลังงานและแหล่งคาร์บอนสำหรับแอแนบอลิซึม ช่วยรักษาเซลล์เฉพาะบางชนิด ช่วยในการโคลนเซลล์ หรือจำเป็นเมื่อความเข้มข้นของซีรั่มในตัวกลางลดลงโซเดียมไพรูเวตยังช่วยลดความเป็นพิษต่อเซลล์ที่เกิดจากสารเรืองแสงอีกด้วยโซเดียมไพรูเวตมักจะถูกเติมที่ความเข้มข้นสุดท้ายที่ 1 มิลลิโมลาร์สารละลายโซเดียมไพรูเวตที่มีจำหน่ายทั่วไปมักจะเป็นสารละลายในการจัดเก็บ 100 mM (100X)

แปลด้วย www.DeepL.com/Translator (เวอร์ชันฟรี)


เวลาโพสต์: 21 มิถุนายน-2022